Thử nghiệm điều chế Auto-vaccine phòng tiêu chảy do E.coli trên heo con sau cai sữa

v
SUMMARY

CAO VAN HOA, Nong Lam University, HCM city. Graduating thesis topic:
“The experiment of auto-vaccine production to protect the post – weaning
piglet from the diarrhoea caused by E. coli”. The thesis was carried out at
Microbiology lab, Microbiology and Infectious Diseases Dept. of Faculty of Animal
Science and Veterinary, Nong Lam University and Gia Nam Ltd. Company, Binh
Duong province from 5/2007 to 8/2007.
Supervisor: Dr. NGUYEN NGOC HAI
First, isolate E. coli from the diarrhoea feces and identify them by IMViC test,
then serotype with F4, F5, F6 antiserum.
Second, selecte 5 E. coli isolates of serotype F4 or F5 to produce the auto-
vaccine.
Third, set up the experiment to evaluate the efficiency of auto-vaccine (the
experiment was repeated in 2 times):
The first group: 3 litters (28 piglets, from 14 to 20 days aged), vaccine
injection one times.
The second group: 3 litters (28 piglets, from 14 to 20 days aged), vaccine
injection two times with 10 days interval.
The control group: 2 litters (22 piglets, from 14 to 20 days aged), adjuvant
injection two times with 10 days interval.
The efficacy of auto-vaccine was evaluated by antiody titers, medium daily gain
and the side effects.
Result:
The auto-vaccine made a high antibody titers and long immunization.
The auto-vaccine did not bring neither the bad effects to piglets vaccinated
health nor the gain weight of piglet.
The results could not conclude exactly the efficacy of auto-vaccine on E.
Coli diarrhoea control.

vi
MỤC LỤC

CHƢƠNG TRANG
Trang bìa 1 i
Trang bìa 2 ii
Lời cảm tạ iii
Tóm tắt tiếng Việt iv
Tóm tắt tiếng Anh v
Mục lục vi
Danh sách các chữ viết tắt xii
Danh sách các hình xiii
Danh sách các bảng xiv
Danh sách các biểu đồ xv
Danh sách các sơ đồ xvi
1. MỞ ĐẦU 1
1.1. Đặt vấn đề 1
1.2. Mục đích và yêu cầu 2
1.2.1. Mục đích 2
1.2.2. Yêu cầu 2
2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

vii
2.1. Vi khuẩn Escherichia coli 3
2.1.1. Định nghĩa 3
2.1.2. Đặc tính sinh hóa 4
2.1.3. Yếu tố kháng nguyên 4
2.1.3.1. Kháng nguyên thân O 4
2.1.3.2. Kháng nguyên bề mặt hay kháng nguyên K 5
2.1.3.3. Kháng nguyên F (fimbriae) 5
2.1.3.4. Kháng nguyên H hay kháng nguyên lông roi (flagella) 6
2.2. Bệnh tiêu chảy 6
2.2.1. Khái niệm 6
2.2.2. Nguyên nhân gây tiêu chảy 7
2.2.2.1. Điều kiện ngoại cảnh bất lợi 7
2.2.2.2. Nuôi dƣỡng không đúng kỹ thuật 7
2.2.2.3. Vi sinh vật 8
2.3. Sự miễn dịch 9
2.3.1. Khái niệm miễn dịch 9
2.3.2. Phân loại miễn dịch 9
2.3.2.1. Miễn dịch không đặc hiệu 9
2.3.2.2. Miễn dịch đặc hiệu 10
2.3.3. Khái niệm về kháng nguyên (antigen) và kháng thể (antibody) 11

viii
2.3.3.1. Kháng nguyên (antigen) 11
2.3.3.2. Kháng thể (antibody) 13
2.4. Auto-vaccine 16
2.4.1. Định nghĩa vaccine 16
2.4.2. Phân loại vaccine 16
2.4.2.1. Vaccine giảm độc lực (attenuated) 16
2.4.2.2. Vaccine bất hoạt (inactivated) 16
2.4.2.3. Các “toxoid” 17
2.4.2.4. Vaccine từng phần hay vaccine dƣới đơn vị (subunit) 17
2.4.2.5. Một số loại vaccine mới đang nghiên cứu 17
2.4.3. Định nghĩa auto-vaccine 18
2.4.4. Quy trình sản xuất auto-vacine 18
2.4.5. Ƣu điểm và nhƣợc điểm của việc sản xuất, sử dụng auto-vaccine 18
2.4.5.1. Ƣu điểm 18
2.4.5.2. Nhƣợc điểm 19
2.5. Chất bổ trợ 19
2.5.1. Định nghĩa chất bổ trợ 19
2.5.2. Tác dụng của chat bổ trợ 20
2.5.3. Chất bổ trợ MONTANIDE (chất bổ trợ đƣợc sử dụng trong đề tài này) 20
3. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 21

ix
3.1. Thời gian và địa điểm 21
3.1.1. Thời gian 21
3.1.2. Địa điểm 21
3.2. Vật liệu 21
3.2.1. Đối tƣợng nghiên cứu 21
3.2.2. Vật liệu và thiết bị 21
3.3. Nội dung 22
3.4. Phƣơng pháp tiến hành 22
3.4.1. Phƣơng pháp lấy mẫu 22
3.4.2. Nghiên cứu vi sinh vật 23
3.4.2.1. Nuôi cấy phân lập 23
3.4.2.2. Kiểm tra sinh hóa 23
3.4.3. Điều chế auto-vaccine 28
3.4.4. Kiểm tra độ vô trùng của auto-vaccine 30
3.4.5. Bố trí thí nghiệm đánh giá hiệu quả auto-vaccine 30
3.4.5.1. Yếu tố thí nghiệm 30
3.4.5.2. Phân phối heo vào các lô thí nghiệm 30
3.4.6. Phƣơng pháp kiểm tra hiệu giá kháng thể bằng phản ứng ngƣng kết chậm
trong ống nghiệm 32
3.4.6.1. Lấy mẫu máu và bảo quản 32
3.4.6.2. Chuẩn bị dịch kháng nguyên 33

x
3.4.6.3. Tiến hành phản ứng 34
3.4.6.4. Đọc kết quả 34
3.5. Các chỉ tiêu theo dõi 35
3.6 Xử lý số liệu 36
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37
4.1. Kết quả lựa chọn chủng E. coli làm auto-vaccine 37
4.2. Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 38
4.3. Hiệu giá kháng thể 39
4.3.1. Thí nghiệm 1 39
4.3.1.1. Lần rút máu thứ nhất 40
4.3.1.2. Lần rút máu thứ hai 40
4.3.1.3. Lần rút máu thứ ba 41
4.3.2. Thí nghiệm 2 43
4.3.2.1. Lần rút máu thứ nhất 43
4.3.2.2. Lần rút máu thứ hai 44
4.3.2.3. Lần rút máu thứ ba 44
4.3.3. Kết quả tổng kết hiệu giá kháng thể 46
4.4. Tỷ lệ heo tiêu chảy 47
4.4.1. Thí nghiệm 1 47
4.4.2. Thí nghiệm 2 48

xi
4.5. Tăng trọng tuyệt đối 50
4.5.1. Thí nghiệm 1 50
4.5.2. Thí nghiệm 2 51
4.5.3. Tổng kết tăng trọng trung bình tuyệt đối của các lô qua 2 thí nghiệm 52
4.6. Các chỉ số khác 52
4.7. Kết quả chung 52
5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 54
5.1. Kết luận 54
5.2. Đề nghị 54
6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 55
7. PHỤ LỤC 57




xii
DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT

E. coli: Escherichia coli
EMB: Eosin Methylene Blue Lactose
KIA: Kligler Iron Agar
TSA: Tryptone Soya Agar
TSB: Tryptone Soya Broth
SCA: Simmons Citrate Agar
TN: Thí Nghiệm
KT: Kháng Thể
IMViC: Indol – Methyl Red – Voges Proskauer – Citrate


xiii
DANH SÁCH CÁC HÌNH

HÌNH TRANG
Hình 3.1. Lấy mẫu phân tiêu chảy ở heo con 22
Hình 3.2. Phân lập E. coli trên môi trƣờng EMB 23
Hình 3.3. Vi khuẩn E. coli lên men lên men đƣờng sinh hơi trong
môi trƣờng KIA 24
Hình 3.4. Vi khuẩn E. coli hình que, màu hồng Gram âm 24
Hình 3.5. Phản ứng Indol 25
Hình 3.6. Phản ứng Methyl Red 25
Hình 3.7. Phản ứng Voges Proskauer 26
Hình 3.8. Phản ứng Citrate 26
Hình 3.9. Rút máu heo con 33




xiv
DANH SÁCH CÁC BẢNG

BẢNG TRANG
Bảng 2.1. Tỷ lệ các vi sinh vật gây tiêu chảy trên heo 8
Bảng 3.1. Phân lô và liều tiêm heo con 31
Bảng 4.1. Hiệu giá kháng thể của 3 lô qua 3 lần rút máu (thí nghiệm 1) 39
Bảng 4.2. Hiệu giá kháng thể của 3 lô qua 3 lần rút máu (thí nghiệm 2) 43
Bảng 4.3. Tổng kết hiệu giá kháng thể của 2 thí nghiệm 46
Bảng 4.4. Kết quả heo bị tiêu chảy ở thí nghiệm 1 47
Bảng 4.5. Kết quả heo bị tiêu chảy ở thí nghiệm 2 48
Bảng 4.6. Tỷ lệ tiêu chảy của heo toàn thí nghiệm 49
Bảng 4.7. Kết quả thống kê tăng trọng trung bình tuyệt đối của 3 lô (TN1) 50
Bảng 4.8. Kết quả thống kê tăng trọng trung bình tuyệt đối của 3 lô (TN2) 51
Bảng 4.9. Tăng trọng trung bình tuyệt đối của các lô qua cả 2 TN 52

Xem chi tiết: Thử nghiệm điều chế Auto-vaccine phòng tiêu chảy do E.coli trên heo con sau cai sữa